核酸提取系列连载（二）
核酸提取系列连载（二）
一、DNA提取方法简介——1、基因组DNA的提取——1.2、SDS法 & 1.3、其它
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。为帮助广大科研工作者进一步掌握核酸提取方法并对实验中常见问题进行处理，德航五洲特推出核酸提取系列，相关问题可在评论区留言。
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核酸提取系列目录 |
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一、DNA提取方法简介 |
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二、DNA提取常见问题、原因分析及其对策 |
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三、RNA提取方法简介 |
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四、RNA提取及其RT-PCR常见问题、原因分析及其对策 |
一、DNA提取方法简介
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1、基因组DNA的提取 |
1.1、CTAB法 |
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1.2、SDS法 |
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1.3、其它 |
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2、非基因组DNA的提取 |
2.1、质粒DNA的提取 |
2.1.1、碱裂解法 |
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2.1.2、煮沸法 |
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2.2、线粒体、叶绿体DNA的提取 |
差速离心结合SDS裂解法 |
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1、基因组DNA的提取
1.2、SDS法
u SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
u SDS法DNA提取缓冲液
u 改良的SDS法
水浴 60min, 其间缓慢摇动几次。加入150ul 的5mol/ LKac, 混匀, 冰浴15min 左右
u SDS法流程图 （以动物组织为例）
1.3、其它
根据细胞裂解方式的不同有：
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物理方式 |
玻璃珠法 |
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研磨法 |
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超声波法 |
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冻融法 |
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化学方式 |
异硫氰酸胍法 |
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碱裂解法 |
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生物方式 |
酶法 |
根据核酸分离纯化方式的不同有：
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吸附材料结合法
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硅质材料
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高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。 快捷高效。 |
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阴离子交换树脂 |
低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。 适用于纯度要求高的实验。 |
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磁珠 |
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物，从而达到分离目的。 |
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浓盐法 |
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离 |
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有机溶剂抽提法 |
有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用 |
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密度梯度离心法 |
利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物 |
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货号 |
CAS号 |
名称 |
质量标准 |
牌价 |
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JS0058-1KG |
1185-53-1 |
Tris 盐酸 |
Ultra Pure Grade |
1220 |
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JS0083-1KG |
60-00-4 |
EDTA 游离酸 |
Ultra Pure Grade |
597.2 |
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JS0060-1KG |
7647-14-5 |
氯化钠 |
Biotechnology Grade |
516 |
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JS0054-1KG |
151-21-3 |
十二烷基硫酸钠 |
Biotechnology Grade |
1409 |
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JS0105-1KG |
593-84-0 |
异硫氰酸胍 |
Biotechnology Grade，99.5%（HPLC) |
1788 |
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JS0024-500G |
9003-39-8 |
聚乙烯吡咯烷酮average mol wt 40,000 |
High Purity Grade |
1227.82 |
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JS0163-500G |
9003-39-8 |
聚乙烯吡咯烷酮average mol wt 10,000 |
High Purity Grade |
1403 |
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