核酸提取系列连载（一）
核酸提取系列连载（一）
一、DNA提取方法简介——1、基因组DNA的提取——1.1、CTAB法
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。为帮助广大科研工作者进一步掌握核酸提取方法并对实验中常见问题进行处理，德航五洲特推出核酸提取系列。
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核酸提取系列目录 |
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一、DNA提取方法简介 |
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二、DNA提取常见问题、原因分析及其对策 |
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三、RNA提取方法简介 |
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四、RNA提取及其RT-PCR常见问题、原因分析及其对策 |
一、DNA提取方法简介
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1、基因组DNA的提取 |
1.1、CTAB法 |
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1.2、SDS法 |
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1.3、其它 |
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2、非基因组DNA的提取 |
2.1、质粒DNA的提取 |
2.1.1、碱裂解法 |
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2.1.2、煮沸法 |
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2.2、线粒体、叶绿体DNA的提取 |
差速离心结合SDS裂解法 |
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1、基因组DNA的提取
1.1、CTAB法
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里。
该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
CTAB提取缓冲液的经典配方
Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP（脱氧核糖核蛋白 ）；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。
CTAB提取缓冲液的改进配方
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）
PVP 按其平均分子量大小分为四级，习惯上常以K值表示，不同的K值分别代表相应的PVP平均分子量范围。K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值，而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量，因此可以用K值来表征PVP的平均分子量。通常K值越大，其粘度越大，粘接性越强。
在研磨过程中加入PVP，其中的CO-N=基有很强的结合多酚的能力，从源头上减少了酚类被氧化的机会。
同时向抽提液中加入还原剂β-巯基乙醇，后者能打断多酚氧化酶中的二硫键，使多酚不易被氧化，随后经抽提而去除。
CTAB法流程图
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货号 |
CAS号 |
名称 |
质量标准 |
牌价 |
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Tris 盐酸 |
Ultra Pure Grade |
1220 |
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EDTA 游离酸 |
Ultra Pure Grade |
597.2 |
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氯化钠 |
Biotechnology Grade |
516 |
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溴代十六烷基三甲胺 |
High Purity Grade |
1238 |
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β-巯基乙醇 |
Biotechnology Grade |
1031 |
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聚乙烯吡咯烷酮average mol wt 40,000 |
High Purity Grade |
1227.82 |
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聚乙烯吡咯烷酮average mol wt 10,000 |
High Purity Grade |
1403 |
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