高压灭菌锅的使用

高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

一、高压蒸汽灭菌的原理

 高压蒸汽灭菌的原理：是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm²时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。温度越高，需时越短，热穿透能力越强。一般认定115℃-121.3℃，对培养基的成分不产生破坏。

二、高压蒸汽灭菌锅的优势 

在一个标准大气压下水的沸点是100摄氏度，压力越高,与之对应压力下的沸点越高，高压蒸汽锅肯定要超过100摄氏度才能沸腾，才能产生蒸汽。至少要等到水煮沸，排出一分钟左右的蒸汽后再把安全阀关闭，这样可以使高压蒸汽锅里的压力迅速上升，原来沸腾的水因为压力的快速上升而停止沸腾，压力大，沸点高，水蒸汽就变成液体水，而放出大量的汽化潜热，就是高温高压的目的，从而达到杀菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：

1、湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；

2、湿热的穿透力比干热大；

3、湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

三、高压蒸汽灭菌使用细节 

1. 高压灭菌锅使用前要水加到水位线；  

2. 将需灭菌的培养基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，检查排气阀、安全阀状态；

3. 打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“work”键，灭菌锅开始工作，自动排冷气，到105℃时，底部排气阀门自动关闭，然后压力开始上升；  

4. 压力升至 0.15MPa（121℃）时，灭菌锅再次自动放气，然后开始记时，一般培养基灭菌20min，蒸馏水灭菌30min；  

5. 达到规定的灭菌时间后，关闭电源，打开放气阀缓慢放气，当压力指针降至 0.00MPa时，放气阀无蒸汽排出时，方可开启锅盖；  

6. 注意事项 ：

a、气未放尽前，不得开启高压锅；

b、切忌将培养基封闭在锅内过夜；

c、压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放气。

四、高压蒸汽灭菌常见错误的分析

高压灭菌锅操作中常见的错误有：

（1）排气不彻底。在升压前应将锅内冷空气排净，因空气是热不良导体，若不排净，冷空气就会聚集井滞留在灭菌锅中消毒筒的中下部，围绕在待灭菌物的周围，导致灭菌不彻底，可能造成大面积染菌。（自动的高压灭菌锅上下排气阀都要打开然后加热排空气）

（2）排气软管没有按要求插入灭菌筒的下部，或排气软管断裂、缺失。灭菌锅内的冷空气是通过排气软管排出的，上述情况将造成灭菌筒外的蒸汽直接经排气阀排出锅外，灭菌锅内的空气排放受阻。

（3）消毒筒内物品堆积太紧、太满，阻碍蒸汽的流通和热交换，使容器内升温减慢，造成物体内部杀菌不完全。

（4）升温过快。灭菌的时间是以达到要求温度后的持续时间计算的，但温度的升降过程同样起到杀菌的作用，升降温度过快会通过影响总的积温而影响灭菌效果。另外，升温过快，特别是使用外源蒸汽的情况下，会造成被灭菌物体内部升温滞后于压力表指示温度。

（5）灭菌的物体体积（容量）过大。组织培养中或常规微生物实验中，高温蒸汽灭菌通常要在121℃下保温15min。这一规定仅适用于试管、三角瓶中小于200ml容量的。若体积太大，特别是固体培养基，会造成灭菌不彻底，应适当延长灭菌时间。

（6）任意延长灭菌时间。规定的灭菌温度和时间是经过科学试验确定的，只要按照正确的灭菌程序是能达到灭菌目的的。但在实践中常有人为了“保证彻底灭菌”而任意延长灭菌时间。这样忽视了杀菌过程中温度对培养基成分的破坏作用，是得不偿失的。

（7）温度不稳定。灭菌过程中温度（压力）忽高忽低，特别是手提式电能灭菌锅，它没有控温装置，难于控温。操作者可配置调压变压器，通过调节电压控温，这样容易导致温度不稳定而灭菌不彻底。

—The end—