【产品简介】

本产品可以直接从细胞或组织中提取总 RNA,它在破碎和溶解细胞时能保持 RNA 的完整性。裂解后加入氯仿震荡 离心，样品分成水相和有机相。RNA 存在于水相中。取水相，可以通过异丙醇沉淀，或者通过硅胶模离心吸附柱纯化回收 RNA。

产品应用：

本品为通用型试剂，可以用于细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总 RNA。细菌和动物组织细胞提取适 用性广。部分多糖多酚或者提取困难的植物组织以及血液提取效果差的情况下，建议使用专用植物 RNA 纯化试剂和 血液 RNA 纯化试剂。

【使用方法】

一 、试剂准备

1.  氯仿，异丙醇。

2.  75%乙醇(用 DEPC水或者超纯水配置) ，RNase-free 水(可以用超纯水或者 DEPC 水)。

二、 操作步骤

(一) 不同样品处理

1.  对贴壁细胞(10 平方厘米)：吸尽培养液，加入1mL 的本产品用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移 至干净的 1.5mL 塑料离心管中。

2.  对悬浮细胞(五百万至一千万个)：离心收集细胞，吸尽液体，加入 1mL  本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解， 然后将裂解液转移到干净的 1.5mL 塑料离心管中。

3.  对新鲜组织(50- 100mg) ：将新鲜组织剪切成小块，放入10mL 或 15mL 塑料离心管中，加入 1mL 的本产品，用匀 浆器匀浆充分，将匀浆液转移至新的 1.5mL 塑料离心管中。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织，使 用量不要超过 30-50mg 。(如无匀浆条件，可以将组织液氮研磨之后，加入 1mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部 裂解，然后将裂解液转移到干净的 1.5mL 塑料离心管中。)

4. 可选方案：如匀浆或者研磨之后的裂解液中有很多悬浮或者不溶物(如肌肉，植物块茎等组织) ，请将匀浆液于

4℃10,000rmp 离心 10min 。将上清转移至新的离心管中。

(二)    RNA 纯化

1. 在装有裂解物/匀浆物的 1.5mL 塑料离心管中加入 0.2mL 氯仿，震荡混匀。1,2000rmp 4℃离心 10min。

2. 将上清液转移到另一干净的 1.5mL 塑料离心管中。下层有机相(粉红色)和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及， 否则将产生蛋白质和 DNA 污染。(可以重复氯仿纯化步骤一次)

3. 在上清液中加入等体积的异丙醇，震荡混匀。1,2000rmp 4℃离心 10 min。

4. 小心吸弃上清液，加入 1mL75%乙醇，震荡混匀。4℃ 7500rmp 离心 5min。

5.  短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇。注意不要吸弃 RNA 沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的后续使用。

6. 室温放 1-2min  晾干沉淀后，加入 50- 100uLRNase-free 水使 RNA 沉淀溶解。千万不要用真空离心法使 RNA 沉淀过 于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。RNA 样品可以立即使用或存放于-80℃待用。

(三)    RNA 检测

1. 得到的 RNA 的质量与操作过程中的多种因素有关。RNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2. 用分光光度计测定 RNA 浓度，OD260 值为 1 相当于大约 40μg/ml 的 RNA。

3. RNA 的 OD260/280 比值通常用作核酸纯度的衡量指标，一般情况下，纯 RNA 的 OD260/280 比值在 1.8-2.1。 OD260/280 比值会受测定所用溶液的 pH 值的影响，例如，纯化 RNA 在 pH7.5 的 10mM Tris 缓冲液中 OD260/280 读 数在 1.9-2. 1 之间，而在中性的水溶液中比值会变低，可能只有 1.8-2.0 ，这并不意味着 RNA 的质量变差。

【保存条件】

2~8°C保存，保质期2年。

【注意事项】

1. 本产品含有腐蚀性成分，请佩戴口罩手套操作。如不慎接触，立即用大量清水冲洗。

2. 本产品有保护RNA的作用，一般操作可以在室温操作。所用的试剂耗材建议使用RNase-free 级别，离心尽可能使用4℃。