【产品简介】

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（还原）是以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。

5×蛋白上样缓冲液分别含有DTT（二硫苏糖醇）和β-ME（β-巯基乙醇），可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

β-ME和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-ME常用浓度为5-20 mmol/L，DTT为0.5-1 mmol/L。因为β-ME加入缓冲液后24小时易被氧化，其后加速蛋白质的失活，而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健，并不危及蛋白的巯基，所以在蛋白制备中常用β-ME，而长期储存用DTT。

含DTT和β-ME冻存的上样液电泳使用区别不明显，除了β-ME气味较大之外。

【使用方法】

1、使用前，将配套产品5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（A）与二硫苏糖醇（B）混合均匀。

2、将混合后的5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液与蛋白样品按照1：4的比例混匀。(加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。)

3、将蛋白样品置于95℃中加热3-5分钟。

4、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。

4、离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。

6、进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。

【保   存】 -20℃保存，保质期12个月。

【注意事项】

1、5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（A）与二硫苏糖醇（B）混合均匀后请尽快使用（最好1个月内）。使用后剩余产品请继续置于-20℃保存，以免影响使用效果。

2、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。

3、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。